Электрофорез

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ ВЫСШЕЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ АВТОНОМНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ЮЖНОГО ФЕДЕРАЛЬНОГО УНИВЕРСИТЕТА

Факультет электроники и приборостроения

Кафедра электрогидроакустической и медицинской техники


реферат


ПО КУРСУ:


ТЕХНИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ЛЕЧЕБНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ



на тему:

ЭлектрофорезВыполнила: Ангоно Н.М. гр. Э-80

проверила: Леонова А.В.

« » 2012г



оценка







г. Таганрог 2012г


Содержание



Введение 3

Принцип метода электрофореза 3

Физико-химические свойства белков и методы их выделения 5

Методы выделенияи очистки белков 6

Методы разрушения тканей и экстракции белков 6

Гомогенизация биологического материала 6

Метод замораживания и оттаивания ткани 6

Экстракция белков, связанных с мембранами, и разрушение олигомерных белков на протомеры 7

Удаление из раствора небелковых веществ 7

Методы очистки белков 7

Очистка белков избирательной денатурацией 8Высаливание 8

Гель-фильтрация, или метод молекулярных сит 9

Ультрацентрифугирование 10

Электрофорез белков 12

Ионообменная хроматография 12

Аффинная хроматография, или хроматография по сродству 14

Очистка белков от низкомолекулярных примесей 15Заключения...............................................................................................................................................16

Список литература………………………………………………………………………………………………………………………………17


















Введение
Электрофорез занимает сейчас центральное место среди методов исследования белков и нуклеиновых кислот. В современной научной литературе редко можно встретить статью, в которой бы на той или иной стадии фракционирования или характеристики этих биополимеровне был использован электрофорез. Метод позволяет разделять макромолекулы, различающиеся по таким важнейшим параметрам, как размеры (или молекулярная масса), пространственная конфигурация, вторичная структура и электрический заряд, причем эти параметры могут выступать как порознь, так и в совокупности.
Принцип метода электрофореза
Физический принцип метода заключается в следующем. Находящиесяв буферном растворе макромолекулы обладают некоторым суммарным электрическим зарядом, величина и знак которого зависят от рН среды. Если через этот раствор, заключенный в канал из изолирующего материала, например, стеклянную трубку, начать пропускать электрический ток, то вдоль канала установится определенный градиент напряжения, т. е. сформируется электрическое поле. Его напряженность измеряетсяразностью потенциалов по концам рабочего канала (или его участка), отнесенной к его длине (В/см). Под действием поля макромолекулы в соответствии со своим суммарным зарядом мигрируют в направлении катода или анода, причем их трение об окружающую среду ограничивает скорость миграции. В зависимости от величины заряда и размеров молекулы приобретают разные скорости, и в этом — сущность процессаэлектрофореза. Постепенно исходный препарат, состоявший из различных молекул, разделяется на зоны одинаковых молекул, мигрирующих с одной и той же скоростью. Со временем эти зоны распределяются по длине канала. В настоящее время почти исключительно используются полиакриламидные гели (ПААГ) и гели агарозы. Варьируя концентрацию полимера, можно получать гели с очень широким диапазоном размеров пор. Кроме того, можноизменять электрические заряды макромолекул путем вариации рН буфера, а их конфигурацию путем введения в буфер денатурирующих агентов или детергентов. Все это придает методу электрофореза исключительную гибкость.
В ходе электрофореза зоны растворенных макромолекул остаются невидимыми. Для наблюдения за процессом в исходный препарат добавляют краситель, молекулы...